Phuputsong ena, liphello tse susumetsang tsa phekolo e kopaneng eabalaoli ba kholo ea limela(2,4-D le kinetin) le nanoparticles tsa iron oxide (Fe₃O₄-NPs) mabapi le morphogenesis ea in vitro le tlhahiso ea bobeli ea metabolite ho *Hypericum perforatum* L. li ile tsa hlahlojoa. Kalafo e ntlafalitsoeng [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] e ntlafalitse haholo liparamente tsa kholo ea semela: bolelele ba semela bo eketsehile ka 59.6%, bolelele ba motso ka 114.0%, palo ea lithunthung ka 180.0%, le boima ba callus fresh ka 198.3% ha bo bapisoa le sehlopha sa taolo. Kalafo ena e kopaneng e boetse e ntlafalitse bokhoni ba ho nchafatsa (50.85%) mme ea eketsa litaba tsa hypericin ka 66.6%. Tlhahlobo ea GC-MS e senotse dikahare tse phahameng tsa hyperoside, β-patholene, le cetyl alcohol, tse etsang 93.36% ya sebaka sohle sa tlhoro, ha dikahare tsa phenolics le flavonoids kaofela di eketsehile ka 80.1%. Diphetho tsena di bontsha hore balaodi ba kgolo ya dimela (PGRs) le Fe₃O₄ nanoparticles (Fe₃O₄-NPs) di na le phello ya tshebedisano mmoho ka ho hlasimolla organogenesis le ho bokellana ha metswako ya bioactive, e leng leano le tshepisang bakeng sa ntlafatso ya biotechnology ya dimela tsa meriana.
Sefate sa St. John's (Hypericum perforatum L.), se tsejoang hape e le sefate sa St. John's, ke semela sa herbaceous sa lelapa la Hypericaceae se nang le boleng ba moruo.[1] Likarolo tsa sona tse ka bang teng tsa bioactive li kenyelletsa li-tannins tsa tlhaho, xanthones, phloroglucinol, naphthalenedianthrone (hyperin le pseudohyperin), flavonoids, phenolic acids, le oli tsa bohlokoa.[2,3,4] Sefate sa St. John's se ka jaloa ka mekhoa ea setso; leha ho le joalo, nako ea mekhoa ea setso, ho mela ha peo e fokolang, le ho angoa habonolo ke mafu li fokotsa bokhoni ba sona ba ho lema ka bongata le ho thehoa ho tsoelang pele ha metabolites ea bobeli.[1,5,6]
Ka hona, temo ea lisele tsa in vitro e nkoa e le mokhoa o atlehang oa ho ikatisa ka potlako ha limela, ho boloka mehloli ea germplasm, le ho eketsa chai ea metsoako ea meriana [7, 8]. Litaolo tsa kholo ea limela (PGRs) li bapala karolo ea bohlokoa ho laoleng mofetoheli 'me lia hlokahala bakeng sa ho lema callus le lintho tse phelang ka har'a vitro. Ntlafatso ea mahloriso le metsoako ea tsona ke ea bohlokoa bakeng sa ho phethela ka katleho lits'ebetso tsena tsa nts'etsopele [9]. Ka hona, ho utloisisa sebopeho le mahloriso a loketseng a li-regulator ho bohlokoa bakeng sa ho ntlafatsa kholo le bokhoni ba ho tsosolosa ba St. John's wort (H. perforatum) [10].
Dikaroloana tse nyane tsa oxide ya tshepe (Fe₃O₄) ke sehlopha sa dikaroloana tse nyane tse seng di ntse di ntshetswa pele bakeng sa temo ya dinama tse nyane. Fe₃O₄ e na le thepa ya bohlokwa ya makenete, ho tsamaellana hantle ha dimela le tikoloho, mme e na le bokgoni ba ho kgothaletsa kgolo ya dimela le ho fokotsa kgatello ya tikoloho, kahoo e hohetse tlhokomelo e kgolo meralong ya temo ya dinama tse nyane. Ditshebediso tse ka bang teng tsa dikaroloana tsena tse nyane di ka kenyeletsa ho ntlafatsa temo ya in vitro ho kgothaletsa karohano ya disele, ho ntlafatsa ho monywa ha dikotla, le ho kenya tshebetsong dienzyme tsa antioxidant [11].
Leha di-nanoparticles di bontshitse ditlamorao tse ntle tsa ho kgothaletsa kgolo ya dimela, dithuto mabapi le tshebediso e kopaneng ya di-nanoparticles tsa Fe₃O₄ le balaodi ba hodisa dimela ba ntlafaditsweng ho *H. perforatum* di ntse di sa fumanehe haholo. Ho tlatsa lekhalo lena la tsebo, phuputso ena e hlahlobile ditlamorao tsa ditlamorao tsa tsona tse kopaneng ho morphogenesis ya in vitro le tlhahiso ya metabolite ya bobedi ho fana ka temohisiso e ntjha ya ho ntlafatsa dibopeho tsa dimela tsa meriana. Ka hona, phuputso ena e na le dipheo tse pedi: (1) ho ntlafatsa mahloriso a balaodi ba kgolo ya dimela ho kgothaletsa ka katleho ho thehwa ha callus, ho ntjhafatsa dithunya, le ho ntsha metso ka vitro; le (2) ho lekola ditlamorao tsa di-nanoparticles tsa Fe₃O₄ hodima diparamente tsa kgolo ka vitro. Merero ya nakong e tlang e kenyeletsa ho lekola sekgahla sa ho phela ha dimela tse ntjhafaditsweng nakong ya ho tloaelana le maemo (in vitro). Ho lebelletswe hore diphetho tsa phuputso ena di tla ntlafatsa haholo bokgoni ba ho ata ha dimela tse ntjhafaditsweng nakong ya ho ikamahanya le maemo (in vitro). Ho lebelletswe hore diphetho tsa phuputso ena di tla ntlafatsa haholo bokgoni ba ho ata ha dimela tse ntjhafaditsweng ba *H. perforatum*, ka hona di kenya letsoho tshebedisong e tsitsitseng le ditshebedisong tsa biotechnology tsa semela sena sa bohlokwa sa meriana.
Thutong ena, re fumane dimela tse melang mahlakung ho tswa dimeleng tsa selemo le selemo tsa St. John's wort (dimela tsa mme). Dimela tsena tse melang mahlakung di sebediseditswe ho ntlafatsa maemo a temo ya in vitro. Pele ho hodiswa, mahlaku a ne a hlatsuwa ka botlalo ka metsi a phallang a hlwekileng metsotso e mmalwa. Dibaka tsa dimela tse melang mahlakung di ile tsa hlatsuwa ka ho qoeliswa ka 70% ethanol ka metsotswana e 30, mme tsa latelwa ke ho qoeliswa ka tharollong ya 1.5% ya sodium hypochlorite (NaOCl) e nang le marothodi a mmalwa a Tween 20 metsotso e 10. Qetellong, dimela tse melang mahlakung di ile tsa hlatsuwa ka makgetlo a mararo ka metsi a hlwekileng a hlwekileng pele di fetisetswa setsing se latelang sa temo.
Libekeng tse 'ne tse latelang, ho ile ha lekanngoa litekanyo tsa ho tsosolosa lithunthung, ho kenyeletsoa sekhahla sa ho tsosolosa, palo ea ho thunya ka semela se seng le se seng, le bolelele ba ho thunya. Ha lithunthung tse tsosolositsoeng li fihla bolelele ba bonyane 2 cm, li ile tsa fetisetsoa setsing sa metso se nang le halofo ea matla a MS, 0.5 mg/L indolebutyric acid (IBA), le 0.3% guar gum. Temo ea metso e ile ea tsoela pele ka libeke tse tharo, 'me nakong eo sekhahla sa metso, palo ea metso le bolelele ba metso li ile tsa lekanngoa. Kalafo ka 'ngoe e ile ea phetoa ka makhetlo a mararo, ka li-explant tse 10 tse lengoang ka ho pheta-pheta, tsa hlahisa li-explant tse ka bang 30 ka kalafo.
Bolelele ba semela bo ne bo lekanngoa ka disentimitara (cm) ho sebediswa rula, ho tloha botlaaseng ba semela ho isa ntlheng ya lekhasi le lelelele ka ho fetisisa. Bolelele ba motso bo ne bo lekanngwa ka dimilimithara (mm) hang ka mora ho tlosa dipeo ka hloko le ho tlosa sebaka se holang. Palo ya di-bud ka semela se seng le se seng e ne e balwa ka ho toba semeleng se seng le se seng. Palo ya matheba a matsho makhasing, a tsejwang ka hore ke di-nodule, e ne e lekanngwa ka pono. Di-nodule tsena tse ntšo ho dumelwa hore ke ditshwele tse nang le hypericin, kapa matheba a oxidative, mme di sebediswa e le sesupo sa mmele sa karabelo ya semela kalafong. Kamora ho tlosa sebaka sohle se holang, boima bo botjha ba dipeo bo ne bo lekanngwa ho sebediswa sekala sa elektroniki ka ho nepahala ha dimiligrama (mg).
Mokhoa oa ho bala sekhahla sa ho thehoa ha callus ke o latelang: kamora ho lema li-explant ka har'a seaplane se nang le balaoli ba kholo ba fapaneng (kinases, 2,4-D, le Fe3O4) ka libeke tse 'ne, palo ea li-explant tse khonang ho theha callus ea baloa. Foromo ea ho bala sekhahla sa ho thehoa ha callus ke e latelang:
Kalafo ka 'ngoe e phetiloe ka makhetlo a mararo, 'me bonyane li-explant tse 10 li hlahlobiloe pheta-phetong ka 'ngoe.
Sekhahla sa tsosoloso se bonts'a karolo ea lisele tsa callus tse phethelang ka katleho ts'ebetso ea ho arohana ha lithunthung kamora mohato oa ho thehoa ha callus. Sesupo sena se bonts'a bokhoni ba lisele tsa callus ho fetoha lisele tse fapaneng le ho hola ho ba litho tse ncha tsa semela.
Palo ea metso ke karolelano ea palo ea makala a khonang ho mela ho ea ho palo eohle ea makala. Sesupo sena se bontša katleho ea mohato oa metso, e leng oa bohlokoa ho phatlalatsoeng ha micro le ho phatlalatsoeng ha limela, kaha metso e metle e thusa lipeo ho phela hamolemo maemong a ho hola.
Metswako ya Hypericin e ntshitswe ka 90% ya methanol. 50 mg ya dimela tse omisitsweng e ile ya eketswa ho 1 ml ya methanol mme ya hlahiswa ka sonic metsotso e 20 ho 30 kHz ka hara sesebediswa sa ho hlwekisa sa ultrasonic (mohlala A5120-3YJ) mochesong wa kamore lefifing. Kamora ho hlahiswa ka sonic, sampole e ile ya kenngwa ka centrifuge ka 6000 rpm metsotso e 15. Supernatant e ile ya bokellwa, mme ho monya ha hypericin ho ile ha lekanngwa ho 592 nm ho sebediswa spectrophotometer ya Plus-3000 S ho ya ka mokgwa o hlalositsweng ke Conceiçao et al. [14].
Bongata ba mekhoa ea phekolo e nang le balaoli ba kholo ea limela (li-PGR) le li-nanoparticles tsa iron oxide (Fe₃O₄-NPs) ha lia ka tsa baka ho thehoa ha li-nodule tse ntšo makhasing a letlobo a tsosolositsoeng. Ha ho li-nodules tse ileng tsa bonoa kalafong efe kapa efe e nang le 0.5 kapa 1 mg/L 2,4-D, 0.5 kapa 1 mg/L kinetin, kapa li-nanoparticles tsa iron oxide tse 1, 2, kapa 4 mg/L. Metsoako e 'maloa e bontšitse keketseho e nyane ea nts'etsopele ea li-nodule (empa e seng ea bohlokoa ka lipalo-palo) maemong a holimo a li-nanoparticles tsa kinetin le/kapa iron oxide, joalo ka motsoako oa 2,4-D (0.5–2 mg/L) le kinetin (1–1.5 mg/L) le li-nanoparticles tsa iron oxide (2–4 mg/L). Liphetho tsena li bontšitsoe ho Setšoantšo sa 2. Li-nodules tse ntšo li emela li-gland tse nang le hypericin e ngata, tse hlahang ka tlhaho le tse molemo. Thutong ena, li-nodules tse ntšo li ne li amahanngoa haholo le ho soothoa ha lisele, ho bontša tikoloho e ntle bakeng sa ho bokellana ha hypericin. Kalafo e nang le li-nanoparticles tsa 2,4-D, kinetin, le Fe₃O₄ e khothalelitse kholo ea callus, ho fokotseha ha sootho, le ho eketseha ha chlorophyll, e leng se bontšang hore ts'ebetso ea metabolism e ntlafetse le phokotso e ka bang teng ea tšenyo ea oxidative [37]. Phuputso ena e hlahlobile liphello tsa kinetin hammoho le li-nanoparticles tsa 2,4-D le Fe₃O₄ kholong le nts'etsopele ea callus ea St. John's wort (Setšoantšo sa 3a–g). Lithuto tse fetileng li bontšitse hore li-nanoparticles tsa Fe₃O₄ li na le mesebetsi ea antifungal le antimicrobial [38, 39] 'me, ha li sebelisoa hammoho le balaoli ba kholo ea limela, li ka susumetsa mekhoa ea tšireletso ea limela le ho fokotsa matšoao a khatello ea sele [18]. Le hoja biosynthesis ea li-metabolites tsa bobeli e laoloa ka liphatsa tsa lefutso, chai ea tsona ea 'nete e itšetlehile haholo ka maemo a tikoloho. Liphetoho tsa metabolism le tsa sebopeho li ka susumetsa maemo a metabolism a bobeli ka ho laola tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso tse itseng tsa limela le ho arabela mabaka a tikoloho. Ho feta moo, di-inducer di ka qala ho kenngwa tshebetsong ha dijini tse ntjha, e leng se susumetsang tshebetso ya enzymatic, qetellong se kenya tshebetsong ditsela tse ngata tsa biosynthetic mme se lebise ho thehweng ha di-metabolite tsa bobedi. Ho feta moo, phuputso e nngwe e bontshitse hore ho fokotsa moriti ho eketsa ho pepesehela letsatsi, ka hona ho phahamisa mocheso wa motsheare sebakeng sa tlhaho sa *Hypericum perforatum*, e leng se boetseng se kenyang letsoho ho eketseheng ha tlhahiso ya hypericin. Ho itshetlehile ka tlhahisoleseding ena, phuputso ena e batlisisitse karolo ya di-nanoparticles tsa tshepe e le di-inducer tse ka bang teng setsong sa dinama. Diphetho di bontshitse hore di-nanoparticles tsena di ka kenya tshebetsong dijini tse amehang ho hesperidin biosynthesis ka ho hlohlelletsa enzymatic, e leng se lebisang ho bokellaneng ho hoholo ha motsoako ona (Setshwantsho sa 2). Ka hona, ha ho bapiswa le dimela tse holang tlasa maemo a tlhaho, ho ka phehisanwa ka hore tlhahiso ya dijini tse jwalo ka hara mmele e ka boela ya ntlafala ha kgatello e itekanetseng e kopanngwa le ho kenngwa tshebetsong ha dijini tse amehang ho kentsweng tshebetsong ha di-metabolite tsa bobedi. Kalafo ya motswako ka kakaretso e na le phello e ntle sekgahleng sa tsosoloso, empa maemong a mang, phello ena e a fokola. Haholo-holo, kalafo ka 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L kinase, le mahloriso a fapaneng a ka eketsa ka boikemelo le ka mokhoa o bonahalang sekhahla sa tsosoloso ka 50.85% ha e bapisoa le sehlopha sa taolo (Setšoantšo sa 4c). Liphetho tsena li bontša hore metsoako e itseng ea li-nanohormones e ka sebetsa ka tsela e lumellanang ho khothaletsa kholo ea limela le tlhahiso ea metabolite, e leng ea bohlokoa haholo bakeng sa setso sa lisele tsa limela tsa meriana. Palmer le Keller [50] ba bontšitse hore kalafo ea 2,4-D e ka baka ka boikemelo ho thehoa ha callus ho St. perforatum, ha ho eketsoa ha kinase ho ntlafatsa haholo ho thehoa ha callus le tsosoloso. Phello ena e bakiloe ke ntlafatso ea ho leka-lekana ha lihormone le ho hlohlelletsa karohano ea sele. Bal et al. [51] ba fumane hore kalafo ea Fe₃O₄-NP e ka ntlafatsa ts'ebetso ea li-enzyme tsa antioxidant ka boikemelo, ka hona e khothalletsa kholo ea metso ho St. perforatum. Mecha ea temo e nang le li-nanoparticles tsa Fe₃O₄ maemong a 0.5 mg/L, 1 mg/L, le 1.5 mg/L e ntlafalitse sekhahla sa tsosoloso ea limela tsa folaxe [52]. Tšebeliso ea li-nanoparticles tsa kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone, le Fe₃O₄ e ntlafalitse haholo sekhahla sa callus le ho thehoa ha metso, leha ho le joalo, litla-morao tse ka bang teng tsa ho sebelisa lihormone tsena bakeng sa tsosoloso ea in vitro li hloka ho nahanoa. Mohlala, tšebeliso ea nako e telele kapa e phahameng ea 2,4-dichlorobenzothiazolinone kapa kinetin e ka fella ka phetoho ea somatic clonal, khatello ea oxidative, sebopeho se sa tloaelehang sa callus, kapa vitrification. Ka hona, sekhahla se phahameng sa tsosoloso ha se bolele esale pele botsitso ba liphatsa tsa lefutso. Limela tsohle tse tsosolositsoeng li lokela ho hlahlojoa ho sebelisoa matšoao a limolek'hule (mohlala, RAPD, ISSR, AFLP) kapa tlhahlobo ea cytogenetic ho fumana hore na li tšoana hakae le limela tsa in vivo [53,54,55].
Phuputso ena e bontšitse ka lekhetlo la pele hore tšebeliso e kopaneng ea balaoli ba kholo ea limela (2,4-D le kinetin) ka li-nanoparticles tsa Fe₃O₄ e ka ntlafatsa morphogenesis le ho bokellana ha li-metabolite tsa bohlokoa tse sebetsang (ho kenyeletsoa hypericin le hyperoside) ho *Hypericum perforatum*. Mokhoa o ntlafalitsoeng oa kalafo (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) ha ea ka ea eketsa feela sebopeho sa callus, organogenesis, le chai ea bobeli ea metabolite empa hape e bontšitse phello e bobebe e bakang, e ka ntlafatsang mamello ea khatello ea maikutlo ea semela le boleng ba meriana. Motsoako oa nanotechnology le setso sa lisele tsa limela o fana ka sethala se tsitsitseng le se sebetsang bakeng sa tlhahiso e kholo ea metsoako ea meriana ka har'a vitro. Liphetho tsena li bula tsela bakeng sa lits'ebetso tsa indasteri le lipatlisiso tsa nakong e tlang mabapi le mekhoa ea limolek'hule, ntlafatso ea tekanyo le ho nepahala ha liphatsa tsa lefutso, ka hona li hokahanya lipatlisiso tsa motheo mabapi le limela tsa meriana le biotechnology e sebetsang.
Nako ea poso: Tshitwe-12-2025