Sethethefatsi sa anthelmintic N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) e tlalehiloe hore e thibela AChE (acetylcholinesterase) 'me e na le lintho tse ka 'nang tsa e-ba le kankere ka lebaka la vascularization e feteletseng. Ka pampiri ena, re bontša hore DEET ka ho khetheha e susumetsa lisele tsa endothelial tse khothalletsang angiogenesis, kahoo e eketsa kholo ea hlahala. DEET e kenya tšebetsong lits'ebetso tsa cellular tse lebisang ho angiogenesis, ho kenyelletsa ho ata, ho falla le ho khomarela. Sena se amahanngoa le tlhahiso e eketsehileng ea NO le polelo ea VEGF liseleng tsa endothelial. Ho khutsisa M3 kapa ho sebelisa li-pharmacological M3 inhibitors ho felisitse liphello tsena kaofela, ho fana ka maikutlo a hore angiogenesis e bakoang ke DEET ke M3-sensitive. Liteko tse amanang le pontšo ea khalsiamo ka liseleng tsa endothelial le HEK tse fetisang li-receptor tsa M3, hammoho le lithuto tse tlamang le tsa docking, li bontša hore DEET e sebetsa e le modulator ea allosteric ea li-receptor tsa M3. Ho feta moo, DEET e thibela AChE, kahoo e eketsa bioavailability ea acetylcholine le ho tlama ha eona ho li-receptor tsa M3, le ho ntlafatsa liphello tsa proangiogenic ka ho laola allosteric.
Li-EC tsa mantlha li ne li arohane le aorta ea litoeba tsa Switzerland. Mokhoa oa ho ntša o ile oa fetoloa ho tsoa ho protocol ea 26 ea Kobayashi. Li-Murine ECs li entsoe ka EBM-2 medium e tlatsitsoeng ka 5% ea FBS e sa sebetseng mocheso ho fihlela temana ea bone.
Phello ea likarolo tse peli tsa DEET ho ata ha HUVEC, U87MG, kapa BF16F10 e ile ea hlahlojoa ho sebelisoa CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes, C7026). Ka bokhutšoanyane, lisele tse 5.103 ka seliba li ile tsa lengoa ka poleiti ea seliba sa 96, e lumelloa ho khomarela bosiu bo le bong, ebe e phekoloa ka DEET bakeng sa 24 h. Ka mor'a hore u tlose mokhoa oa ho hōla, eketsa tharollo e tlamang dae selibeng se seng le se seng sa microplate ebe u kenya lisele ka 37 ° C bakeng sa 30 min. Maemo a Fluorescence a ile a khethoa ho sebelisoa sebali sa microplate sa Mithras LB940 multimode (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Germany) se nang le li-filters tsa 485 nm le li-530 nm emission filters.
HUVEC e ile ea lengoa ka lipoleiti tse 96-liliba ka har'a seliba sa lisele tse 104 ka seliba se seng. Lisele li ile tsa phekoloa ka DEET bakeng sa 24 h. Ho sebetsa ha sele ho ile ha hlahlojoa ho sebelisoa tlhahlobo ea MTT ea colorimetric (Sigma-Aldrich, M5655). Litekanyetso tsa khatello ea mahlo li fumanoe ho sebali sa microplate sa multimode (Mithras LB940) ka bolelele ba 570 nm.
Liphello tsa DEET li ile tsa ithutoa ho sebelisoa litlhahlobo tsa in vitro angiogenesis. Kalafo e nang le 10-8 M kapa 10-5 M DEET e ile ea eketsa sebopeho sa bolelele ba capillary ho HUVECs (setšoantšo sa 1a, b, mekoallo e tšoeu). Ha ho bapisoa le sehlopha sa taolo, phekolo e nang le likhahla tsa DEET ho tloha 10-14 ho ea ho 10-5 M e bontšitse hore bolelele ba capillary bo fihlile sehlabeng ho 10-8 M DEET (Supplementary Fig. S2). Ha ho phapang e kholo e fumanoeng ho in vitro proangiogenic effect ea li-HUVEC tse tšoaroang ka DEET sebakeng sa mahloriso sa 10-8 M le 10-5 M.
Ho fumana phello ea DEET ho neovascularization, re entse lithuto tsa vivo neovascularization. Ka mor'a matsatsi a 14, litoeba tse kenngoa ka lisele tsa endothelial precultured le 10-8 M kapa 10-5 M DEET li bontšitse keketseho e kholo ea litaba tsa hemoglobin (setšoantšo sa 1c, mekoallo e tšoeu).
Ho feta moo, DEET-induced neovascularization e ile ea ithutoa ho U87MG xenograft-bearing litoeba tse neng li kenngoa letsatsi le leng le le leng (ip) le DEET ka tekanyo e tsejoang ka ho susumetsa plasma concentrations ea 10-5 M, e leng ntho e tloaelehileng ho batho ba pepesehileng. ka 23. Lihlahala tse bonoang (ke hore lihlahala> 100 mm3) li ile tsa hlokomeloa matsatsi a 14 ka mor'a ho kenngoa ha lisele tsa U87MG ho litoeba. Ka letsatsi la 28, kholo ea hlahala e ile ea ntlafatsoa haholo ho litoeba tse tšoaroang ke DEET ha li bapisoa le litoeba tsa taolo (setšoantšo sa 1d, lisekoere). Ho feta moo, ho chesoa ha lihlahala tsa CD31 ho bontšitse hore DEET e ekelitse haholo sebaka sa capillary empa eseng bongata ba microvessel. (Setšoantšo sa 1e–g).
Ho fumana karolo ea li-receptor tsa muscarinic ka ho ata ho bakoang ke DETA, 10-8 M kapa 10-5 M DETA ka pel'a pFHHSiD (10-7 M, mohanyetsi oa M3 ea khethiloeng) o ile a sebelisoa. Kalafo ea HUVEC. pFHHSiD e thibetse ka botlalo thepa ea ho ata ea DETA maemong ohle (Letlapa la 1).
Tlas'a maemo ana, re boetse re hlahlobile hore na DEET e ka eketsa bolelele ba capillary liseleng tsa HUVEC. Ka mokhoa o ts'oanang, pFHHSiD e ile ea thibela haholo bolelele ba capillary bo bakoang ke DEET (setšoantšo sa 1a, b, grey bar). Ho feta moo, liteko tse tšoanang li ile tsa etsoa ka M3 siRNA. Le hoja siRNA ea taolo e ne e sa sebetse ho khothalletsa ho thehoa ha capillary, ho khutsisa ha M3 muscarinic receptor ho ile ha felisa bokhoni ba DEET ho eketsa bolelele ba capillary (setšoantšo sa 1a, b, mekoallo e ntšo).
Ho feta moo, ka bobeli 10-8 M kapa 10-5 M DEET-induced vascularization in vitro le neovascularization in vivo e ne e thibetsoe ka ho feletseng ke pFHHSiD (Fig. 1c, d, circles). Liphetho tsena li bonts'a hore DEET e khothaletsa angiogenesis ka tsela e hlokolosi ho bahanyetsi ba M3 receptor kapa M3 siRNA.
AChE ke sepheo sa molek'hule sa DEET. Lithethefatsi tse kang donepezil, tse sebetsang e le AChE inhibitors, li ka susumetsa EC angiogenesis in vitro le ho mouse hindlimb ischemia mehlala14. Re lekile phello ea likhakanyo tse peli tsa DEET tšebetsong ea enzyme ea AChE ho HUVEC. Libaka tse tlaase (10-8 M) le tse phahameng (10-5 M) tsa DEET li fokotsehile endothelial AChE mosebetsi ha li bapisoa le maemo a taolo (setšoantšo sa 2).
Likhakanyo ka bobeli tsa DEET (10-8 M le 10-5 M) li fokolitse ts'ebetso ea acetylcholinesterase ho HUVEC. BW284c51 (10-5 M) e ne e sebelisoa e le taolo ea acetylcholinesterase inhibitors. Liphetho li hlahisoa e le liperesente tsa ts'ebetso ea AChE ho HUVEC e tšoaroang ka likhakanyo tse peli tsa DEET ha li bapisoa le lisele tse tšoaroang ke koloi. Litekanyetso li hlahisoa joalo ka ± SEM ea liteko tse tšeletseng tse ikemetseng. *p <0.05 bapisoa le taolo (Kruskal-Wallis le Dunn multiple papiso teko).
Nitric oxide (NO) e ameha ts'ebetsong ea angiogenic 33, ka hona, HA HO tlhahiso ea li-HUVEC tse susumelitsoeng ke DEET e ile ea ithutoa. Tlhahiso ea endothelial NO e entsoeng ka DEET e ile ea eketseha ha e bapisoa le lisele tsa taolo, empa e fihlile bohlokoa feela ka tekanyo ea 10-8 M (setšoantšo sa 3c). Ho fumana liphetoho tsa limolek'hule tse laolang tlhahiso ea NO e susumelitsoeng ke DEET, polelo ea eNOS le ts'ebetso li ile tsa hlahlojoa ke Western blotting. Le hoja phekolo ea DEET ha ea ka ea fetola polelo ea eNOS, e ile ea eketsa haholo phosphorylation ea eNOS sebakeng sa eona sa ts'ebetso (Ser-1177) ha e ntse e fokotsa sebaka sa eona sa ho thibela (Thr-495) ha se bapisoa le lisele tse sa tšoaroeng ka eNOS phosphorylation (Fig. 3d). Ho feta moo, karo-karolelano ea phosphorylated eNOS sebakeng sa ts'ebetso le sebaka sa inhibitory se ile sa baloa ka mor'a hore ho tloaelehe palo ea phosphorylated eNOS ho palo eohle ea enzyme. Karolelano ena e ile ea eketseha haholo ho li-HUVEC tse tšoaroang ka mahloriso a mang le a mang a DEET ha a bapisoa le lisele tse sa tšoaroeng (setšoantšo sa 3d).
Qetellong, polelo ea VEGF, e 'ngoe ea lintlha tse ka sehloohong tsa proangiogenic, e ile ea hlahlobjoa ke ho thibela Bophirimela. DEET e ekelitse polelo ea VEGF haholo, athe pFHHSiD e thibetse polelo ena ka botlalo.
Kaha litlamorao tsa DEET li na le kutloelo-bohloko ho thibelo ea meriana le ho theola taolo ea li-receptor tsa M3, re ile ra leka khopolo ea hore DEET e ka ntlafatsa pontšo ea khalsiamo. Hoa makatsa hore ebe DEET e ile ea hlōleha ho eketsa cytoplasmic calcium ho HUVEC (data e sa bontšoang) le HEK / M3 (Fig. 4a, b) bakeng sa likarolo tse peli tse sebelisoang.
Nako ea poso: Dec-30-2024